浅谈初步研究冬虫夏草二级接种步骤

　　摘要:冬虫夏草(Cordyceps sinensis sacc)具有很大的经济价值,但目前天然冬虫夏草逐渐减少。现在人们开始了人工培养冬虫夏草。在实验中冬虫夏草二级接种是人工培养冬虫夏草的关键。冬虫夏草二级接种是指由一级种接到接种瓶内。二级种更有利于冬虫夏草子实体的长出。接种前需要配制培养基和灭菌。接种时动作要快且准降低污染率。接种后,放在黑暗室温下培养,观察结果,分析原因,探索更好的方法,从而更利于冬虫夏草子实体的长出。

　　冬虫夏草,冬天是虫,夏天是草,冬虫夏草简称虫草,是冬季真菌寄生于虫草蛾幼虫体内,到了夏季发育而成。冬虫夏草主要分布在青海,西藏,四川,云南,贵州,甘肃海拔4000米左右的高海拔地区,而且含量非常少。冬虫夏草虫体呈金黄色,淡黄色或黄棕色,药用价值高功效好。在国内外被视为珍品,市场需求量大,但因其天然资源量稀少,故价格十分贵。

　　冬虫夏草可以降低血液中的胆固醇和甘油三酯,提高对人体有利的高密度脂蛋白,减轻动脉粥样硬化。

　　除次之外,冬虫夏草还具有直接抗病毒、调节中枢神经系统功能、调节性功能等作用。冬虫夏草能对人体起到如此全面的保健作用,可谓神奇之极,也无愧自古以来“仙草”的美称。在现代社会,服用冬虫夏草已不仅仅是本身身体健康的保证,更重要的是由此带来的极致健康生活品质。

　　1 材料和方法

　　1.1 材料

　　在做二级接种实验时所用的材料:冬虫夏草(Cordyceps sinensis sacc)一级种是由2005年5月从西藏采来的冬虫夏草子实体经无菌分离培养所得。根据多次试验培养基成分结论如下:葡萄糖10g、磷酸氢二钾1g、蛋白胨7g、维生素B2两片、七水硫酸镁0.3g、水1000ml、650ml大米。

　　1.2 方法

　　药品的称量:对于一克以下的用精确的天平称量。在称量过程中,先调节天平所在的平面平衡以及天平平衡,并在左盘中放张滤纸后也要平衡。然后,制定规格,用药匙向左盘中放入所要称取得药品直到平衡。但要注意先把天平放下来,再取盘中的药品。

　　大于等于一克的物品用托盘天平量取即可。首先调节托盘天平平衡,在这一过程中,要注意先把游码调到零点,调平后按左物右码的规则。移动游码直到所需的规格,然后,用药匙向左盘中放药品直到平衡,则左盘中的药品即为所称量的。

　　用量筒量取1000ml的水和650ml的大米。

　　在进行二级种培养基制作过程中,我们运用了一个方案

　　将量好的葡萄糖、磷酸氢二钾、蛋白胨,维生素B2、七水硫酸镁,同时溶解在1000ml水中,用玻璃棒搅拌使溶质完全溶解。设总体积为v,称取0.65v大米约650ml的大米,并用自来水冲洗一遍。把冲洗干净的大米和所配制的溶液放入蒸压锅内,蒸成熟米饭,然后冷直室温,再平均装到十个接种瓶(本试验用的是白色耐高温高压的罐头瓶)内。在装的过程中必须使米饭疏松平齐,然后用细绳和单层塑料袋扎上瓶口。完成后再灭菌。

　　灭菌过程如下:把接种瓶放到灭菌筐中,在灭菌筐放进高压灭菌锅前先检查高压灭菌锅内是否有足够的水,检查标准是看锅底部中央有一个圆孔,当水面高于或等于圆孔面时就可以。再打开电源,然后按设置按钮,通过上下键来调节温度、时间,即125摄氏度、30分钟。最后按液相按钮。此时也可以设定一个保温温度。灭菌后切断电源,通过红外感应打开盖[开盖时身体侧向一旁,因为开盖会有大量热气冒出以免烫伤]小心地把接种瓶摆放在桌面上冷直二十四小时。

　　二级接种是指将试管[一级]内的冬虫夏草菌丝接到空间相对较大的接种瓶内,从而有利于冬虫夏草子实体的长出。

　　接种步骤:

　　接种前,需将净化工作台提前打开二十分钟,一便工作台内的空气是纯净的,同时也节省时间,提高工作效率。在净化工作台上做实验时,需将净化工作台的每一个面都要有用酒精棉彻底擦干净,台上的任何物品也要彻底擦干净。接种时,手也要用酒精棉擦干净,还要带口罩。接种所用的任何仪器如接种铲也要擦干净。接种时,把接种瓶打开试管口不能碰到接种瓶口,而且不能在接种瓶口的上方,用接种铲把试管内的三分之一或四分之一的菌丝快速地放到接种瓶内,并且要使菌丝与大米接触(生长菌丝的面与大米接触]提高菌丝扩展速度。接种时要快速低污染地工作,接种过程中接种铲不要碰到任何面。接种完毕后,在净化工作台上把接种瓶封闭好,然后关掉净化工作台,在写标签[内容:实验名冬虫夏草二级种、作者、日期)。整理净化工作台,打扫地面,刷洗试管,把洗净的试管口向下放在斜面上凉干。把接种瓶放在黑暗室温下培养。 培养两个月时,把接种瓶平均分成三组,编号为a、b、c。在实验台上向a组加细沙子,向b组加大沙子,向c组不加任何东西。

　　a、b、c组的接种瓶放在黑暗室温下培养。

　　2 实验结果

　　这种方法取得实验结果如下:

　　培养三天时,接种瓶内有少量的白色菌丝长出,但有些接种瓶内出现青色被青霉菌污染,还有的变黑、红等,出现这种现象说明此接种瓶已经被污染,需要及时清洗干净,一防止其他接种瓶的污染。(清洗污染接种瓶,带上口罩用小铲把里面的大米全部挖出来放到垃圾袋内,把接种瓶放到水盆里加些洗调剂,用刷子刷,然后再冲洗一遍,倒立在桌面凉干。)

　　几天后有大量白色菌丝长出,同时也有的变红色、黑色、青色等被青霉菌等所污染,同样也要把污染的接种瓶清洗干净,被污染的接种瓶清洗方法如上。

　　十五天,有大量白色菌丝往下延伸,逐渐长满整个接种瓶。此时也有少量接种瓶被污染,也同样的把污染的接种瓶清洗掉。

　　一个月,白色菌丝长满接种瓶,有时也会发现接种瓶内有水珠,则为菌丝呼吸作用的结果。菌丝也延伸到接种瓶的底部。菌落成各种形态,高低不平,出现高峰和低谷。这时有污染的接种瓶则不用清洗掉,因为此时接种瓶内的冬虫夏草菌丝占优势对其他菌的抵抗力增强。

　　两个月,白色菌丝长满接种瓶,发现接种瓶内有水珠。

　　3 讨论

　　由实验结果可知,造成污染的主要原因是由主观造成的。由于自身的操作能力不够或者是在操作中忽视了会造成二级种污染的外来物质。因此在以后要多动手,提高操作能力。同时也要避免外来物质的侵入。通过查找文献,我们了解到了温度、湿度、光照、空气对冬虫夏草子实体长出的影响。过高或过低的温度造成冬虫夏草菌丝的死亡;培养基的营养物质不要太干燥否则不利于子实体的长出;培养冬虫夏草时应避光置于黑暗下培养;在培养后期应该向接种瓶内充氧气,这样有利于冬虫夏草子实体的长出。

　　人工培养冬虫夏草成功后,要扩大培养,供给人们的需求。同时降低了冬虫夏草的价格,使贫困的人也能买冬虫夏草。人工培养出冬虫夏草避免了冬虫夏草的灭绝,有利于资源的多样性。人工培养出冬虫夏草会推动医学的发展,会生产出各种各样的药品和保健品,给社会带来了财富,给人们带来了健康。